Цифровая ПЦР: абсолютное количественное определение и области применения
Краткое изложение авторской публикации врача в сообществе «Врачи РФ» от .
Автор объясняет, что цифровая ПЦР (цПЦР) позволяет определить абсолютное количество нуклеиновых кислот, тогда как количественная ПЦР в реальном времени (кПЦР) обычно дает относительную оценку. В цПЦР образец перед амплификацией разделяют на множество ячеек или капель; после реакции подсчитывают положительные сигналы и рассчитывают исходную концентрацию с учетом распределения Пуассона. Стандартная калибровочная кривая для цПЦР не нужна. Точность зависит от числа и объема ячеек и их заполненности; метод подвержен техническим ошибкам и ложным сигналам.
Автор отмечает, что цПЦР применяют для обнаружения редких мутаций и последовательностей, небольших изменений экспрессии генов и количества копий. После обратной транскрипции метод используют для анализа РНК, а также для количественной оценки библиотек секвенирования нового поколения. Для высокопроизводительных задач и анализа крупных изменений экспрессии автор считает подходящими традиционную ПЦР и кПЦР.
Главное
- Автор описывает цПЦР как метод абсолютного количественного определения нуклеиновых кислот без стандартной калибровочной кривой.
- В цифровой ПЦР образец разделяют на ячейки или капли, а концентрацию рассчитывают по положительным сигналам с учетом распределения Пуассона.
- Цифровую ПЦР применяют для обнаружения редких мутаций и небольших изменений экспрессии генов.
- После обратной транскрипции цПЦР используют для анализа РНК.
Подготовлено автоматически с помощью ИИ, возможны неточности. Полный просмотр материала доступен только для медицинских специалистов с высшим медицинским образованием.
Войти Регистрация